盧建紅 邵衛星 龍進學 劉玉良 石火英 劉秀梵. H9N2禽流感病毒反向遺傳系統轉錄/表達載體的構建和驗證. 中國病毒學-2005年4期
發表人:kickingbird 發表時間:2006年5月26日16点20分 來源:中國病毒學-2005年4期
設計帶有BsmBI、BsaI或AarI酶切位點的引物,用RTPCR擴增H9N2亞型禽流感病毒(AIV)的8個基因全長片段。克隆人雙向轉錄/表達載體pHW2000,並在PB2、PB1和NA基因中共引入了3個沉默突變標簽。將其2個表面基因(HA和NA基因)加上任意1個內部基因,而其它5個內部基因來自A/WSN/33,進行了6種3+5組合形式的基因重排,把相應組合的轉錄/表達質粒共轉染COS-1細胞,均產生了預期組合、有感染性的H9N2亞型流感病毒,表明親緣關系遙遠的流感病毒可以互相獲取基因片段產生重組病毒,提示表面結構基因和單個內部基因不足以限制H9N2 AIV在哺乳動物細胞上的宿主範圍,同時也驗證了構建的8個轉錄/表達載體均能有效工作,為進一步研究H9N2亞型AIV基因結構與功能、AIV與宿主之間的關系打下了基礎。
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