根據H9N2亞型禽流感病毒血凝素基因序列設計並合成引物,從本室分離並保存的H9N2亞型禽流感病毒中擴增了預計約1683bp的血凝素基因,將此擴增産物克隆進pMD18-T載體,限制性酶切及序列測定後,進一步將其亞克隆到pGEX-KG中,與GST蛋白融合表達.SDS-PAGE和Western印迹表明缺失信號肽後的HA基因在大腸杆菌中獲得了表達,表達産物具有免疫學活性,融合蛋白的分子量約爲90kD,位于包涵體中.包涵體經變性、複性處理,利用複性産物作爲抗原包被酶標板建立了檢測H9亞型禽流感抗體ELISA方法.結果表明應用HA重組蛋白作爲診斷H9亞型禽流感抗原具有特異性強、敏感性高、重複性好的特點,可用于H9亞型禽流感抗體的檢測.
禽流感血凝素基因的原核表達及其在H9亞型診斷中的應用.pdf