G4歐亞禽類H1N1（G4 EA-H1N1）豬流感病毒仍在中國豬中被檢測到，因其重配基因組和人畜共患病潛力，仍令人擔憂。本研究鑒定了2023年至2025年間在中國六個省份從患有呼吸道疾病的豬中分離出的六種H1N1病毒。系統發育分析顯示，所有六個分離株均屬於G4基因型，並保留了典型的基因組星座，包括EA譜系HA和NA基因、pdm09衍生的PB2、PB1、PA、NP和M片段，以及一個三重重配位NS片段。序列分析發現了HA抗原和受體結合相關區域的氨基酸取代，以及預測的HA和NA糖基化模式的差異。分子對接表明，HAs可以容納α2,3和α2,6連接的唾液酸受體類似物。對96個田間豬血清進行血凝抑制測試顯示，62個樣本（64.6%）對代表性分離株JS0602的滴度≥為1：40，且所有采樣區域的血清均檢測到對JS0602的血清活性。JS0602在MDCK細胞中高效複制，並在實驗感染豬中引起呼吸體征、肺部病變、病毒抗原沉積和病毒脫落。這些發現為當代G4 EA-H1N1病毒提供了最新的遺傳和生物學信息，支持對豬群的持續監測。