當前的H5N1大流行呈現出前所未有的宿主範圍擴展，包括在美國奶牛中的持續傳播，該情況於2024年3月被檢測到。到2026年7月，全國19個州的1,150多家奶牛場已報告感染情況。盡管疫情最初集中在德克薩斯州，但加利福尼亞州已成為主要的傳播中心，並占據了因接觸感染奶牛而感染人類的絕大多數病例。奶牛中的持續傳播及反複向人類的溢出增加了病毒獲得適應哺乳動物突變的機會，從而可能提高人畜共患病和大流行風險。血凝素（HA）蛋白在調節病毒受體結合及空氣傳播方面起著核心作用。在本研究中，我們對加利福尼亞奶牛中流行病毒中發現的HA突變的受體結合及穩定性表型進行了表征。使用生物層幹涉技術和假病毒進入實驗評估了受體結合特異性。所有測試的HA變體仍然偏好禽類型α2,3-聯結的唾液酸受體。我們通過融合和熱穩定性實驗評估了HA的穩定性。所有突變體的融合pH值均大於5.5，高於與人類高效空氣傳播相關的範圍（pH 5.0-5.5）。然而，突變D88G和S94N提高了pH穩定性，其融合pH值分別為5.6和5.7，而野生型HA為5.9。攜帶這兩種突變的病毒顯示出更高的熱穩定性。這些結果表明，盡管獲得了可略微增強HA穩定性的突變，來自牛的H5N1病毒仍保持禽類受體特異性。H5N1病毒在奶牛中的演變凸顯了基因組和表型監測的重要性，以識別可能增加人畜共患風險的突變。