H3N2亞型禽流感病毒（AIV）在禽類和野鳥中廣泛流行；然而，某些毒株具有演化潛力並可能跨越物種屏障，從而對公共衛生構成重大威脅。本研究調查了中國南方H3N2亞型AIV的遺傳演化與致病性。結果顯示，9株分離株的全部8個基因片段均聚類於歐亞譜系，其內部基因源自多個亞型（包括H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7和H9），表明H3N2 AIV存在複雜的基因重配現象。三株代表性分離株（LZD44、NND98和NND100）能在雞和小鼠的多種組織中複制。值得注意的是，攜帶哺乳動物適應性突變PB2-MVV和NP-I353V的LZD44病毒，在雞和小鼠中的致病力顯著高於其他兩株毒株。這些發現表明，H3N2亞型禽流感病毒無需預先適應即可傳播至其他物種，凸顯了跨物種傳播的風險。因此，持續監測H3N2亞型禽流感病毒對於有效預防和管理禽流感至關重要。