设计带有BsmBI、BsaI或AarI酶切位点的引物，用RTPCR扩增H9N2亚型禽流感病毒（AIV）的8个基因全长片段。克隆人双向转录／表达载体pHW2000，并在PB2、PB1和NA基因中共引入了3个沉默突变标签。将其2个表面基因（HA和NA基因）加上任意1个内部基因，而其它5个内部基因来自A／WSN／33，进行了6种3＋5组合形式的基因重排，把相应组合的转录／表达质粒共转染COS-1细胞，均产生了预期组合、有感染性的H9N2亚型流感病毒，表明亲缘关系遥远的流感病毒可以互相获取基因片段产生重组病毒，提示表面结构基因和单个内部基因不足以限制H9N2 AIV在哺乳动物细胞上的宿主范围，同时也验证了构建的8个转录／表达载体均能有效工作，为进一步研究H9N2亚型AIV基因结构与功能、AIV与宿主之间的关系打下了基础。

H9N2禽流感病毒反向遗传系统转录／表达载体的构建和验证.pdf