高致病性禽流感（HPAI）H5N1病毒向奶牛的溢出表明哺乳动物宿主具备维持全球性流行的能力，并为人类传播开辟了途径。涉及奶牛的HPAI研究受限于高生物安全级别下饲养大型动物的空间需求。采用小反刍动物模型可扩大样本量、降低成本、提升安全性并减少研究开展的后勤障碍。本研究确立奶山羊作为HPAI乳腺感染的动物模型。通过乳腺内接种HPAI H5N1基因型D1.1和B3.13导致急性乳腺炎、产奶量下降及乳汁病毒大量排出。经灭活病毒的皮内接种可诱导血液和乳汁中产生抗原特异性抗体，减轻临床症状、限制乳汁病毒排出并缓解产奶量损失。HPAI H5N1在奶牛中的疾病动态可以在产奶山羊中重现，为研究发病机制和支持控制策略开发提供了相关模型。