当前的H5N1大流行呈现出前所未有的宿主范围扩展，包括在美国奶牛中的持续传播，该情况于2024年3月被检测到。到2026年7月，全国19个州的1,150多家奶牛场已报告感染情况。尽管疫情最初集中在德克萨斯州，但加利福尼亚州已成为主要的传播中心，并占据了因接触感染奶牛而感染人类的绝大多数病例。奶牛中的持续传播及反复向人类的溢出增加了病毒获得适应哺乳动物突变的机会，从而可能提高人畜共患病和大流行风险。血凝素（HA）蛋白在调节病毒受体结合及空气传播方面起着核心作用。在本研究中，我们对加利福尼亚奶牛中流行病毒中发现的HA突变的受体结合及稳定性表型进行了表征。使用生物层干涉技术和假病毒进入实验评估了受体结合特异性。所有测试的HA变体仍然偏好禽类型α2,3-联结的唾液酸受体。我们通过融合和热稳定性实验评估了HA的稳定性。所有突变体的融合pH值均大于5.5，高于与人类高效空气传播相关的范围（pH 5.0-5.5）。然而，突变D88G和S94N提高了pH稳定性，其融合pH值分别为5.6和5.7，而野生型HA为5.9。携带这两种突变的病毒显示出更高的热稳定性。这些结果表明，尽管获得了可略微增强HA稳定性的突变，来自牛的H5N1病毒仍保持禽类受体特异性。H5N1病毒在奶牛中的演变凸显了基因组和表型监测的重要性，以识别可能增加人畜共患风险的突变。