流感导致呼吸道感染及相关并发症，对全球公共卫生构成重大威胁。然而，在控制流感大流行中，流感病毒的快速且准确检测仍然具有挑战性，因为现有的诊断方法是静态的，无法区分可存活和不可存活的病毒，也无法直接监测病毒复制动力学。在此，我们报告了具有化学发光/荧光双响应功能的病毒发光报告分子（VLRs），用于H1N1病毒蛋白酶的无创成像和尿液分析。VLR由一个由N-乙酰神经氨酸封闭的双环二恶烷化学发光骨架信号结构组成，该骨架进一步连接一个肾脏可清除基团（2-羟丙基）-β-环糊精。VLR在H1N1病毒检测中的检测下限为2.62 CCID50/mL，比ICA-qPCR和PMA-qPCR检测分别低10.4倍和529.8倍。在对 H1N1 病毒感染的小鼠进行气管内给药后，VLR 能够高效聚集于肺部，并特异性与神经氨酸酶反应，从而恢复其近红外化学发光/荧光信号，实现实时成像。利用肾脏清除途径（约 94% ID），VLR 可通过体外尿液分析实现对 H1N1 病毒感染的远程检测及抗病毒疗效的监测。因此，本研究强调了在动态监测病毒复制活性方面的重要进展，并将病毒特异性探针转化为尿液报告物。