2025年12月，在荷兰一家奶牛场发现一只猫感染了高致病性禽流感（HPAI）H5N1亚型2.3.4.4b基因型DI.2.1病毒。对荷兰奶牛的乳汁和血清样本进行了禽流感病毒检测，未检测到病毒RNA；但在72头荷兰泌乳奶牛中有34头（47.2%）、38头荷兰幼龄牛中有24头（63.2%）的血清样本中检测到了H5N1特异性抗体。这表明高致病性禽流感H5N1在欧洲的哺乳动物宿主范围正在扩大。
自2024年3月以来，美国（US）发生了大规模的高致病性禽流感（HPAI）H5N1病毒爆发。相比之下，尚无报告与欧洲基因型DI.2.1相关的乳牛感染HPAI H5N1的证据。这里介绍了一项病例调查和农场层面调查，该调查首次在欧洲乳牛中检测到针对HPAI H5N1的抗体。
2025年12月24日，采集并提交了一只生活在奶牛场的4个月大家猫的鼻腔、直肠和结膜拭子样本，该猫表现出临床症状，包括嗜睡和呼吸症状，符合HPAI病毒感染。猫两天后去世了。三份拭子样本均通过RT-qPCR检测出甲型流感病毒阳性，并通过Illumina全基因组测序确定该病毒为HPAI H5N1演化系2.3.4.4b基因型DI.2.1。系统发育分析显示，自2025年10月以来，该病毒与与欧洲野生和家禽爆发相关的HPAI H5N1病毒聚集。
在猫体内检测到的HPAI H5N1病毒不含PB2 M631L取代反应，而该病毒在美国B3.13基因型中常被报道感染乳牛。PB2 E627K替代，作为哺乳动物适应性的一个明确特征标志，也存在。此外，检测到PB2 I292V取代，该替代在早期欧洲HPAI H5N1病毒中很少见，但现在主要在DI基因型中被鉴定。猫序列中未发现其他已知影响毒力、宿主特异性或宿主蛋白结合的遗传标记。
在猫体内检测到HPAI H5N1病毒后，同一农场的奶牛进行了禽流感病毒和抗体检测，作为流行病学调查的一部分。2026年1月15日，采集了20个独立牛奶样本（四个乳房四分之一的中游牛奶）和一个散装牛奶箱样本。通过针对基质基因的RT-qPCR检测到任何牛奶样本中未检测到病毒RNA。然而，在9个单独的牛奶样本和含有核蛋白（NP）-ELISA的散装牛奶样本中检测到了针对甲型流感病毒的抗体。

2026年1月22日，对农场进行了重访：从所有哺乳奶牛中采集了单独的牛奶（n=70）和血清（n=72）样本，以及38头1-2岁幼牛的血清样本（见表）。在本次农场级调查中，所有牛奶和血清样本均采用NP-ELISA、H5-ELISA（ID Influenza Screen H5 Indirect ELISA， ID）及血凝抑制（HI）检测，针对两种H5抗原LPAI H5N1 A/鸡/NL-Swifterband/14002541/2014（EPI_ISL_176754）和HPAI H5N8 A/chicken/Netherlands/20016597-026030/2020 （EPI_ISL_603132），均依据世界动物卫生组织（WOAH）陆地手册，使用八个血凝单位。所有检测到NP-ELISA抗体的样本（除一个牛奶样本外，因材料不足）随后通过病毒中和试验（VNT）检测，使用Madin-Darby犬肾细胞和2.3.4.4b H5N1病毒（H5N1 A/Chicken/Netherlands/21037287-006010/2021，EPI_ISL_5588100）。由欧盟禽流感参考实验室提供的牛血清样本（A/turkey/Italy/21VIR9520-3/2021 H5N1亚型，BPL灭活HPAI病毒，一种由威尼斯实验动物动物研究所生产的高浓度抗原），内含针对H5类群2.3.4.4b的抗体，作为阳性对照。
如果NP-ELISA和VNT均呈阳性，则该样本被视为阳性。病毒中和测试结果几乎证实了所有NP-ELISA阳性结果。任何牛奶样本中均未检测到HI滴度，而在72个哺乳奶牛血清样本中测得11个（15.3%）检测到HI滴度，38个幼牛样本中有3个检测到HI滴度。HI滴度范围为10到40。在八个具有最高VNT滴度的血清样本中，利用基于Luminex技术和ProteinAG偶联的多重血清学检测法，鉴定出针对H5和N1的抗体。综上，在72头泌乳奶牛中的34头（47.2%）和38头幼牛中的24头的血清样本中检测到针对H5N1的抗体。在70头奶牛中的14头（20.0%）的牛奶样本中检测到抗体。