高致病性禽流感A(H5N1)病毒对牛乳腺表现出强烈的嗜性，这挑战了我们对甲型流感病毒宿主范围和组织特异性的理解。我们在泌乳期乳牛中使用甲型流感A(H5N1) B3.13基因型病毒进行了实验研究，以确定感染剂量、暴露途径以及与发病率和死亡率相关的因素。在此，我们证明，即使通过乳腺内接种仅10 TCID50，也能建立强烈的感染，并在乳汁中释放高滴度病毒。尽管感染剂量很低，H5N1病毒并不容易通过被污染的挤奶设备或与感染动物的密切接触传播。高剂量乳腺内暴露会导致严重疾病和死亡，而呼吸道和口腔暴露则较不容易建立有效感染及相关发病。这项研究对目前关于H5N1在奶牛场传播的假说提出了挑战，并引发了关于可能的病原体、宿主或环境共同因素如何促成病毒传播的重要问题。