最近在奶牛中出现的高致病性禽流感（HPAI）H5N1（分支2.3.4.4b，基因型B3.13）对农业部门和公共卫生构成了重大挑战。由于动物处理的限制和已建立的细胞培养模型的可用性有限，对牛感染和传播的机制研究已被证明是困难的。本文分离并研究了原代牛胚胎成纤维细胞（BeEF），作为研究甲型流感病毒（IAV）感染动力学的模型。我们比较了感染牛高致病性禽流感H5N1和2022年分离的早期2.3.4.4b基因型（B1.1）后BeEF的唾液酸化特征、感染性病毒产生、病毒复制和斑块形态。这里提供的数据表明，与α-2,6唾液酸相比，BeEF中α-2,3唾液酸的表达增加，与之前在牛乳腺组织中报道的唾液酸化特征相似。这些数据还显示，牛源高致病性禽流感H5N1毒株在牛和禽细胞系中的病毒适应性增加，这与之前在牛乳腺组织中的特征一致。此外，BeEF对2022年H1N1pdm09样IAV毒株完全敏感，同时保持对2009年H1N1ppm09 IAV的抗性，如之前在乳腺细胞中所描述的那样。这项研究强调了高致病性禽流感H5N1在哺乳动物中持续的人畜共患适应性，以及与选定的2009年人类H1N1大流行谱系毒株共感染的可能性，从而有可能开发出重组毒株。这些数据支持BeEF作为研究牛宿主中IAV感染的补充体外系统的能力。