自2024年3月以来，高致病性的H5N1亚型禽流感病毒感染了美国奶牛并在奶牛场中传播。奶牛场需要H5N1监测系统，但关于环境采样是否能为这些系统提供信息尚不足。为指导监测框架，我们确定了四个州（加利福尼亚、科罗拉多、密歇根和俄亥俄）H5N1影响乳品场（n=25）上存在甲型流感病毒（IAV）的环境位置，并探讨了可能影响病毒检测的样本特征。共计623个来自环境和销售谷仓的样本进行了IAV鉴定，并根据位置分为六个类别。共检测到94个样本（15.1%）检测到IAV，大多数类别包括：挤奶设备/个人防护装备、客厅表面和污水/泻湖/粪便。这些结果表明，最可能孕育IAV的乳制品环境是接触牛奶的环境，尽管环境样本中的病毒载量通常低于在部分农场测试的散装罐牛奶。采用混合效应建模，探讨IAV检测、Ct值与疫情发生天数及样本采集类别之间的关系。疫情发生后采集的样本与IAV检测相关，采集类别与测得的Ct值相关。这些结果可能指导乳制品场的H5N1监测工作，并通过在H5N1疫情前、中、后采集农场环境样本的研究得到加强。