高致病性禽流感（HPAI）H5N1病毒自1997年以来一直在水鸟中流行，在全球范围内引起家禽爆发和偶尔的人类感染。最近，H5N1 2.3.4.4b分支的一种新的重组变体在美国的跨物种传播给牛，加剧了人们对宿主范围扩大和潜在人类感染的担忧。由于不可能从其宿主中根除H5N1病毒，因此必须为H5N1衍生株引起的潜在流行病做好准备。利用缺失的NS1减毒流感病毒载体活疫苗系统（DelNS1 LAIV）（我们之前在开发新冠肺炎疫苗时使用的系统），我们基于公开的序列，快速开发了用于牛H5N1和相关分支2.3.4.4b毒株的鼻内疫苗。我们的研究表明，单次鼻内免疫可以有效地抵御高致病性禽流感牛或水貂H5N1变种的致命攻毒挑战，在雌性小鼠和雄性仓鼠模型中两个月后提供强大、持续的免疫力。免疫原性分析表明，DelNS1 LAIV鼻内接种可诱导小鼠产生强烈的中和抗体、粘膜IgA和T细胞反应。进一步评估DelNS1 H5N1 LAIV系统对于为未来可能在人类中爆发的H5N1疫情做好准备至关重要。