流感病毒对公共卫生构成重大风险，每年都会导致大量人类疾病和死亡。季节性流感疫苗必须定期更新，由于与流行毒株不匹配，其有效性往往会降低。此外，灭活疫苗不能提供对可能引起大流行的转移流感病毒的保护。高致病性禽流感H5N1分支2.3.4.4b在世界各地的野生鸟类中流行，自2024年3月以来，在美国（US）引发了一场影响家禽和奶牛的多州疫情。在这项研究中，我们产生了牛源性人流感a/Texas/37/2024 H5N1低致病性版本的NS1缺陷突变体，即LPhTXdNS1，并在针对野生型（WT）a/Texas/37/2002 H5N1的主要疫苗接种方案中验证了其安全性、免疫原性和保护效力。LPhTXdNS1在体外的衰减通过其在培养细胞中的复制减少和无法控制IFNβ启动子激活得到证实。在C57BL/6J小鼠中，与WT A/Texas/37/2024 H5N1相比，LPhTXdNS1降低了病毒复制和致病性。值得注意的是，接种LPhTXdNS1的小鼠表现出高免疫原性，在免疫后第3周和第4周达到峰值，从而对随后的WT A/Texas/37/2024 H5N1致命攻击提供了强有力的保护。总之，我们证明单剂量接种LPhTXdNS1疫苗是安全的，能够诱导针对H5N1的保护性免疫反应。安全性和保护性免疫都表明，LPhTXdNS1有望成为一种潜在的解决方案，在疫情发生时满足对有效疫苗的迫切需求，以治疗受感染的动物和人类。