美国奶牛中H5N1高致病性禽流感病毒（HPAIV）的意外爆发引发了兽医和公共卫生方面的重大担忧。美国何时以及如何将H5N1高致病性禽流感病毒引入奶牛，以及牛感染甲型流感病毒（IAV）的更广泛流行病学尚不清楚。在此，我们进行了一项回顾性研究，使用针对核蛋白（NP）的酶联免疫吸附试验（ELISA）筛查2023年1月至2024年5月从美国不同牛品种收集的1700多头牛血清样本，以检测IAV感染，并通过血凝抑制（HI）试验对阳性样本进行了进一步检测。结果显示，来自美国15个州的1724个样本中有586个（33.99%）通过NP ELISA检测呈血清阳性，其中2024年收集了78个样本，2023年收集了508个样本。此外，HI检测显示，这些ELISA阳性样本中有45个对人类季节性H1N1和H3N2以及猪H3N2和H1N2病毒呈阳性，有些对两到三种测试的IAV呈阳性。令人惊讶的是，这些ELISA阳性样本中没有一个对流行的牛H5N1毒株呈HI阳性。我们的研究结果表明，H5N1以外的IAV可以感染牛，感染不仅限于奶牛，而且牛感染猪和人类IAV的情况在H5N1爆发之前就已经发生。所有结果都强调了监测牛体内IAV流行病学的价值，因为这些病毒可能会适应牛和/或与目前流行的H5N1高致病性禽流感病毒重组，从而增加对人类的风险。