禽流感病毒H5N1血凝素基因和神經氨酸酶基因在大腸杆菌中的表達.pdf目的:克隆、表達和鑒定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神經氨酸酶基因(neuram idinase,NA)序列,為制備抗體和基因工程疫苗打下基礎。方法:在成功克隆禽流感病毒H5N1全長HA、NA基因並測序的基礎上,將部分基因序列克隆到表達載體pET32a(+)上,全基因序列克隆到表達載體pGEX4T-1上,構建了重組表達質粒pET32a(+)/HA(49～1587bp)、pET32a(+)/NA(121～1141bp)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,轉化大腸杆菌BL21/rosetta,IPTG誘導表達,利用Ni2+親和層析柱和GSTraP4B親和層析柱對重組蛋白進行純化,並用Western blotting和ELISA方法檢測其抗原性。結果:重組蛋白在大腸杆菌中可以高效達,SDS-PAGE顯示其相對分子質量與預計大小一致,蛋白純度占總蛋白的90%以上。ELISA和Western blotting實驗證實,重組蛋白具有良好的抗原性。結論:成功克隆和表達了禽流感病毒H5N1HA、NA基因序列,為禽流感病毒H5N1診斷試劑和疫苗的開發等進一步的研究奠定了基礎。