參考禽流感病毒(AIV)M基因和HA基因序列設計了3對引物,其中1對爲針對不同HA亞型AIV的通用引物,另外2對爲分別針對AIVH5和H7亞型的特異性引物。這些引物所擴增的cDNA片段大小分別爲244、860和634bp。利用這3對引物,通過對多重RTPCR擴增條件的優化,成功建立了快速檢測鑒別AIVH5、H7亞型的多重RTPCR技術。特異性和敏感性試驗結果表明,該技術對AIVH5亞型同時擴增出2條大小分別爲244bp和860bp的cDNA片段;對AIVH7亞型同時擴增出2條大小分別爲244bp和634bp的cDNA片段;對AIVH5和H7亞型混合樣品能同時擴增出3條大小分別爲244、860和634bp的cDNA片段;對其他AIVHA亞型只擴增出1條244bp的cDNA片段;對其他常見禽病病原擴增均爲陰性;該多重RTPCR對AIVRNA、AIVH5和AIVH7亞型RNA的最低檢出量分別爲10、100和100pg。
H5和H7亞型禽流感病毒多重反轉錄聚合酶鏈反應快速檢測及鑒別方法的建立.PDF