豬口腔液中甲型流感病毒RNA穩定方法的初步評估

在豬中對甲型流感病毒(IAV)的監測在很大程度上依賴於分子檢測,但在口液等診斷樣本中,如果不保持冷鏈條件,RNA的穩定性可能會迅速受到影響。本試點研究評估了四種分子級碳水化合物(20%海藻糖、山梨醇、蔗糖和甘露醇)以及兩種商業核酸穩定劑(PrimeStore MTM和RNAlater)在暴露於現場相關應激條件下,保持豬口液中可通過RT-qPCR檢測的IAV RNA的能力。從實驗感染H1N2的豬收集的口液樣本(研究1:n = 150;取樣日DPI 2、3、4)或感染H1N2和H3N2的豬(研究2:n = 58;取樣日DPI 5)被分別存儲在25°C下最多144小時(研究1)或經曆2、5、10或15次凍融循環(研究2),以DPI(研究1)或亞型(研究2)作為生物學重複,由於樣本量有限。IAV 檢測被量化為效率標准化的 Cq 值(ECq),並使用線性混合效應模型進行分析。整體而言,在熱應激和凍融應激條件下,碳水化合物(海藻糖、山梨醇、蔗糖)和商業穩定劑的 ECq 值均高於未處理的口腔液樣本。由於樣本量有限,這些結果應謹慎解讀,但它們顯示了碳水化合物作為一種低成本、非滅活的替代方案,在現場采集的口腔液中穩定 IAV RNA 的潛在應用價值。