面對高致病性禽流感病毒（HPAIV）H5N1譜系2.3.4.4b在鳥類中的出現及其在奶牛中的傳播，全球診斷實驗室亟需快速可靠的檢測方法來識別人類感染HPAIV的情況。我們改進並評估了一種分子型甲型流感亞型檢測方法，該方法基於高通量全自動平台，可檢測A(H1N1)pdm09、A(H3N2)、A(H5)及泛型甲型流感靶標。針對靶標包容性/排他性，我們對既往發表的靶標引物和探針（Panning等、Terrier等及世界衛生組織）進行了修改，並適配為羅氏cobas5800/6800/8800系統的多重反應。為評估新型亞型分型檢測的分析性能，采用外部質量評估（EQA）樣本作為標准並采用數字PCR進行定量。通過95%概率單位分析確定的檢測限分別為：A(H1N1)pdm09亞型754.0數字拷貝（dcp）/毫升，A(H3N2)亞型148.0 dcp/毫升，A(H5)亞型156 dcp/毫升，以及流感A全靶標45.2 dcp/毫升。針對每個亞型分型靶標，至少評估了四個對數階的線性關系（決定系數r2：0.9969–0.9998）。該檢測與EQA樣本、德國弗裏德裏希·洛夫勒研究所（Friedrich Loeffler Institut）的洗脫液以及采用132份臨床樣本進行的CE-IVD手工檢測均顯示100%一致性。在專一性樣本集中未檢測到假陽性結果。本新型亞型分型檢測完全自動化、易於擴展，適用於監測和常規臨床環境，可實現人類高致病性禽流感病毒感染的檢測，並有助於在早期階段阻斷潛在傳播鏈。