2024年3月，美國德克薩斯州首次報告奶牛感染高致病性禽流感病毒 (HPAIV) 2.3.4.4b H5N1亞型感染病例。隨後，該病毒迅速傳播至13個州的 190多個農場。在這裏，我們提供了兩個獨立的 2.3.4.4b 進化枝實驗感染研究的結果，評估了 (i) 牛對美國H5N1牛分離株基因型B3.13 (H5N1 B3.13) 的口鼻易感性和傳播性和 (ii) 哺乳母牛在乳腺直接接種 H5N1 B3.13 或當前歐盟H5N1野鳥分離株基因型euDG (H5N1 euDG)後的易感性。犢牛接種導致中度鼻腔複制和脫落，但沒有嚴重的臨床症狀或傳播給哨兵犢牛。在奶牛中，感染不會導致鼻腔脫落，但在兩種H5N1分離株中均觀察到嚴重的急性乳腺感染，伴有壞死性乳腺炎和高燒。牛奶產量迅速大幅下降，奶牛的身體狀況嚴重受損。牛奶中的病毒滴度迅速達到峰值10^8 TCID50/mL，但並未發生全身感染。值得注意的是，適應性突變 PB2 E627K 在 H5N1 euDG 乳房內複制後出現。我們的數據表明，除了H5N1 B3.13 之外，其他HPAIV H5N1毒株也有可能在奶牛乳房中複制，並且牛奶和擠奶程序（而不是呼吸道傳播）可能是牛之間H5N1傳播的主要途徑。