提高H9N2亞型禽流感病毒的拯救效率條件的優化_賈佳_趙永祥.pdf目的:在原有的8質粒轉染體系的基礎上,提高H9N2亞型禽流感病毒8質粒轉染的效率。方法:以脂質體細胞轉染法,用293T細胞和MDCK細胞共轉染A/Chicken/Jiangsu/SH14(H9N2)禽流感病毒的8個連接在PHW2000載體上的反向遺傳質粒,並且NS片段攜帶有GFP綠色熒光基因。通過TPCK胰酶的濃度,DMSO,尿囊液的作用,以及轉染後孵育時間來摸索出最佳的轉染條件。轉染後48h用倒置熒光顯微鏡檢測綠色熒光,並計算出轉染效率。結果:通過統計學分析結果可見,轉染後8h,使用DMSO處理後再加入1ug/m L的TPCK胰酶,轉染效率最高,綠色熒光表達的最多。結論:我們通過聯合DMSO和TPCK的方法一定程度上提高了H9N2亞型禽流感病毒8片段轉染的效率