目的流感病毒非结构蛋白1(nonstructural protein 1，NS1)抑制干扰素调节因子(interferon regulatory factors，IRF)3的机制未明，TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1，TBK-1)能使IRF-3活化，研究NS1是否对TBK-1有抑制作用。方法亚克隆IRF-3、NS1和TBK-1至pcDNA3．1-flag构建flag-IRF-3、flag-NS1和flag-TBK-1质粒；用TBK-1对TBK-1+NS1以及IRF-3+TBK-1对IRF-3+TBK-1+NS1两组实验，分别共转染人胚胎肾上皮293细胞，用抗flag抗体作Western blot分析，鉴定IRF-3、NS1和TBK-1的表达，观测NS1对TBK-1活化IRF-3的抑制作用；荧光素酶功能分析方法观测NS1对TBK-1诱导的干扰素p(IFN-β)启动子-pGL-2B荧光素酶活性的影响。结果IRF-3、NS1和TBK-1均有高表达。TBK-1能使IRF-3活化，Western blot分析显示：TBK-1转染的细胞出现迁移较慢的IRF-3Ⅲ和Ⅳ型，NS1共转染可使IRF-3Ⅲ和Ⅳ型几乎消失；荧光素酶功能分析显示，NS1能抑制TBK-1活化内源性IRF-3所诱导的IFN-β启动子活性，约为对照组的1，4，TBK-1+IRF-3共转染可使IFN-β启动子活性增高近1000倍，NS1可使TBK-1活化外源性IRF-3所诱导的IFN-β启动子的活性降至对照组的约1／2至1／3。结论流感病毒NS1可抑制TBK-1所致的IRF-3活化，功能分析提供了NS1显著抑制TBK-1诱导的IFN-β启动子活性的证据，首次阐明了流感病毒NS1抑制IRF-3因而抑制干扰素β产生的机制之一是通过TBK-1信号通路所取得，为新的抗病毒治疗及新药开发战略提供了基础。
流感病毒非结构蛋白对TBK-1的抑制作用.pdf