根据H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因序列设计并合成引物,从本室分离并保存的H9N2亚型禽流感病毒中扩增了预计约1683bp的血凝素基因,将此扩增产物克隆进pMD18-T载体,限制性酶切及序列测定后,进一步将其亚克隆到pGEX-KG中,与GST蛋白融合表达.SDS-PAGE和Western印迹表明缺失信号肽后的HA基因在大肠杆菌中获得了表达,表达产物具有免疫学活性,融合蛋白的分子量约为90kD,位于包涵体中.包涵体经变性、复性处理,利用复性产物作为抗原包被酶标板建立了检测H9亚型禽流感抗体ELISA方法.结果表明应用HA重组蛋白作为诊断H9亚型禽流感抗原具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于H9亚型禽流感抗体的检测.
禽流感血凝素基因的原核表达及其在H9亚型诊断中的应用.pdf