近年来，中国家禽中出现了多种携带源自H9N2病毒内部基因的新型重配禽流感病毒（AIVs），并多次导致人类感染，这突显了H9N2内部基因盒在促进跨物种传播中的关键作用。在本研究中，从表现呼吸症状的鸡和侯丹鸡中分离出五株H6N1和一株H6N2 AIVs。遗传分析显示，这些H6 AIVs的血凝素（HA）基因属于ST339样系，并来源于中国家鹅中流行的H6 AIVs，而其神经氨酸酶（NA）基因则分别来源于H9N2或H5N1 AIVs。值得注意的是，这些H6分离株的全部六个内部基因均来源于G57基因型H9N2病毒。体外研究表明，这些H6 AIVs能够在禽类和哺乳动物细胞中有效复制。H6N2分离株表现出对类禽受体和类人受体的双重受体结合亲和力，而五株H6N1病毒在体外检测条件下未显示可检测的受体结合亲和力。逆向遗传重配体试验进一步显示，H6N1的HA本身具有内在的双重受体结合亲和力。此外，这些H6分离株在小鼠中表现出高毒性，并在鸡中诱导明显的呼吸道症状，同时在鸟类之间有效传播。总体而言，我们的研究结果表明，携带G57 H9N2内部基因组的H6禽流感病毒正在鸡群中积极循环，对家禽健康构成重大威胁，凸显其对公共卫生的潜在风险，并强调了在人类-禽类界面持续监测的必要性。