2.3.4.4b谱系高致病性禽流感（HPAI）H5N1病毒的持续大流行已达到临界点，表现为前所未有的哺乳动物跨物种传播以及美国奶牛持续暴发。尽管这些病毒在传统雪貂模型中仍具有高致死性，但人类感染--主要与B3.13和D1.1谱系相关--症状明显较轻，通常仅表现为结膜炎且呼吸道受累程度极低。本研究通过评估近期H5N1分离株的感染性，采用生理相关的气液界面（ALI）培养系统（整合气溶胶沉降室）来解决这一矛盾现象。我们证明，尽管直接液体接种能导致高效复制，但气溶胶传播的H5N1毒株在感染人类呼吸道上皮细胞的能力上存在显着缺陷。相比之下，原型H5N1病毒无论通过何种接种途径，均在雪貂中保持高度致病性和致死性，并能系统性扩散至大脑及其他器官。我们的研究发现，导致这种呼吸道限制的两个主要病毒决定因素是：神经氨酸酶（NA）酶活性降低和聚合酶活性受损。综合这些结果表明，常用的哺乳动物模型可能高估了当前的人类大流行风险。这项工作凸显了建立替代风险评估平台的迫切需求，以识别这些病毒克服现有适应人类障碍所需的特定基因变异。