自2020年出现以来，H5N1谱系2.3.4.4b已发现多种基因型，其中B3.13和D1.1在美国成为两种主要且值得关注的基因型。然而，它们在哺乳动物中的相对致病性和传播性尚未完全阐明。我们比较了德克萨斯州由B3.13（A/Texas/37/2024; HPhTX B3.13）和路易斯安那州由D1.1（A/Louisiana/12/2024; HPhLA D1.1）引发的首批两例人类H5N1谱系2.3.4.4b感染病例在感染与传播雪貂模型中的致病性和传播性。HPhTX B3.13感染导致更严重的临床症状和增强的病毒脱落，与HPhLA D1.1相比，其传播性证据更为明显。组织病理学分析显示，感染HPhTX B3.13的动物肺部病变更为广泛，这与病毒载量升高和炎症反应加剧相一致。重要的是，两种基因型在针对候选疫苗病毒（CVV）株诱导的雪貂血清反应性、受体结合特性、神经氨酸酶（NA）活性及热稳定性方面均无显着差异。全基因组测序结果表明，HPhTX B3.13在感染或传播过程中未出现适应性突变。相比之下，HPhLA D1.1在感染的雪貂中迅速获得了哺乳动物适应性突变E627K，并在唯一死亡的接触动物中同时出现了E627K和Q194K突变。这两种突变均与聚合酶活性增强有关，计算分析表明它们可增强与哺乳动物宿主因子ANP32A和B的相互作用。我们的研究结果表明，B3.13已充分适应哺乳动物的感染和传播，而D1.1则通过快速获得适应性突变保留了进化潜力，这突显了与人畜共患病风险评估和大流行防备相关的重要基因型特异性差异。