2020年高致病性禽流感H5N1（2.3.4.4b）全动物分支的出现标志着甲型流感病毒（IAV）宿主范围的大幅扩大，引发了人们对进一步跨物种传播事件和人畜共患溢出的担忧。将2.3.4.4b病毒引入美国奶牛群导致了广泛的传播，伴随着牛奶产量下降、乳腺炎和牛奶中的高病毒载量。值得注意的是，奶牛中的病毒传播代表了哺乳动物适应和传播的新途径，自2024年以来，该途径已导致美国40多例人类病例。在这里，我们研究了禽支2.3.4.4b病毒是否可以感染阿伯丁安格斯牛、荷斯坦-弗里西亚牛和利木赞牛的乳腺组织，这三个品种通常在欧洲、美洲和大洋洲养殖。使用乳腺外植体，我们用表达三种2.3.4.4b病毒血凝素和神经氨酸酶糖蛋白的减毒重组病毒接种组织，这些病毒早于H5N1在美国牛中出现：A/鸡/英格兰/053052/2021（AIV07）、A/鸡/苏格兰/054477/2021（AIV09）和A/鸡/英国/085598/2022（AIV48）。在感染AIV09和AIV48后，使用免疫组织化学在所有三个品种的乳头和腺池的外植体中鉴定出受感染的上皮细胞，表明三个受试牛种中的每一个的乳腺组织都允许H5N1感染。凝集素染色显示，所有供体的乳腺组织中都表达了α2,3连接和α2,6连接的唾液酸，这表明所有三个品种都有可能支持鸟类和哺乳动物适应的IAV的感染。总之，这些发现表明，来自肉牛和奶牛品种的乳腺都可以感染适应鸟类和哺乳动物的H5N1病毒，并强调了这种组织作为IAV重组混合容器的潜力，强调了将牛纳入持续的H5N1监测和风险评估框架的必要性。