自2020年以来，2.3.4.4b亚群的H5Nx高致病性禽流感病毒（HPAIVs）已经持续在各大洲传播，导致全球范围的爆发。在2023–2024（23/24）和2024–2025（24/25）冬季，2.3.4.4b亚群的H5Nx HPAIVs在家禽养殖场引起多次疫情，并在韩国野鸟中被检测到。本研究报道了2.3.4.4b亚群H5N1、H5N6和H5N3 HPAIVs的出现，并分析了这些病毒在23/24和24/25冬季从家禽和野鸟中分离出的遗传特征。在23/24季节期间，H5N6和H5N1 HPAIVs引起了疫情（家禽：32例，野鸟：19例），而在24/25季节，检测到H5N3和H5N1 HPAIVs（家禽：47例，野鸟：43例）。值得注意的是，从北飞雁中分离出一种新型H5N3 HPAIV，并被鉴定为与以往报道的H5N3 HPAIV不同的重配病毒。血凝素（HA）基因的系统发育分析显示，两个流行季的病毒都与欧亚地区分离的高致病性禽流感病毒（HPAIVs）密切相关。基因星座分析在23/24流行季期间鉴定出两种不同的H5N1病毒基因型（23G0-G1）和一种H5N6病毒基因型（23G2），其中H5N6是该时期的主要亚型。在24/25流行季，检测到五种不同的H5N1病毒基因型（24G0–G4），其中24G1是主要流行的基因型。我们的结果表明，H5N6 HPAIVs似乎与H5N1病毒一起在东亚地区传播。此外，在24/25流行季，韩国发现的两种H5N1病毒基因型也在同期的邻国被检测到：24G0在韩国和日本均有发现，而24G1则在韩国、日本和蒙古都有检测。因此，更好地了解高致病性禽流感病毒（HPAIVs）的遗传特性，对于推断病毒的引入途径和在现场实施有效的控制措施非常重要。